AH109感受態(tài)細胞產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
AH109 Chemically Competent Cell 產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)
產(chǎn)品規格
AH109： 10×100μl 保存條件：-80℃
PGADT7（control vector）：10ng/μl 10μl 保存條件： 4℃
Carrier DNA： 5ug/μl 100 μl 保存條件： 4℃
PEG/liAC： 5 ml 保存條件： 4℃
基因型
MATa, trp1-901, leu2-3, 112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ,LYS2 : : GAL1UAS-GAL1TATA-HIS3, MEL1 GAL2UAS-GAL2TATA-ADE2, URA3::MEL1UAS-MEL1TATA-lacZ
產(chǎn)品說(shuō)明
AH109感受態(tài)細胞是實(shí)驗室常用酵母雙雜用菌株，MATa型，可轉化質(zhì)?；騧ating操作，Transformation marker為: trp1, leu2，報告基因為：HIS3, ADE2, lacZ, MEL1，經(jīng)PGADT7質(zhì)粒檢測轉化效率為104cfu/μg DNA 。
操作方法
1. 取100 μl冰上融化的AH109感受態(tài)細胞，依次加入預冷的目的質(zhì)粒1-5ug，Carrier DNA（95-100度5min,快速冰浴，重復一次）10 ul ，PEG/liAC 500ul并吸打幾次混勻，30度水浴30 分鐘（15 min時(shí)翻轉6-8次混勻）。
2. 將管放42度水浴15min （7.5 min時(shí)翻轉6-8次混勻）。
3. 5000 rpm 離心 40s 棄上清，ddH2O 400ul 重懸，離心 30s 棄上清。
4. ddH2O 50ul重懸，涂板。
5. 28-30度 ，培養48-96小時(shí)。
注意事項
1. 感受態(tài)細胞最好在冰上融化。
2. 轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。
3. 同時(shí)轉化2-3種質(zhì)粒時(shí)可增加質(zhì)粒的用量。
