EHA105(pSoup)：                                                     100μl/支
pGs2（control vector，10ng/μl )                                    10μl
保存條件(保質(zhì)期)：                                         -80℃（12個(gè)月） 
基因型
C58 (rif^R) Ti pEHA105 (pTiBo542DT-DNA) Succinamopine (pSoup-tet^R)
產(chǎn)品說(shuō)明

EHA105菌株由EHA101菌株改造而來(lái)，為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無(wú)自身轉運功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pEHA105 (pTiBo542DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。在EHA105菌株中轉入help質(zhì)粒：pSoup即為EHA105 (pSoup)菌株，可幫助pGreen，62SK，pGs2系列質(zhì)粒在農桿菌中復制，同時(shí)賦予該菌株四環(huán)素（tet）抗性，適用于水稻、煙草等植物的轉基因操作。本公司生產(chǎn)的EHA105(pSoup)化學(xué)轉化感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，pGs2(卡那霉素抗性)質(zhì)粒檢測轉化效率>10⁴ cfu/μg DNA。
操作方法
1. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)于室溫或手心片刻待其部分融化，處于冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰中。
2. 每100 μl感受態(tài)加入0.01-1 μg質(zhì)粒DNA（轉化效率較高，第一次使用前最好做預實(shí)驗確定所加質(zhì)粒的量），用手撥打管底混勻，依次于冰上靜置5分鐘、液氮5分鐘、37℃水浴5分鐘、冰浴5分鐘。
3. 加入700 μl無(wú)抗生素的LB或YEB液體培養基，于28℃振蕩培養2~3小時(shí)。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天
（當平板只含有50 μg/ml kan 時(shí)，28℃培養48 h即可；平板中同時(shí)加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 時(shí)，需28℃培養60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養72-90 h）。
注意事項
1. 加入質(zhì)粒時(shí)體積不應大于感受態(tài)體積的1/10；質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，轉化效率急劇下降；質(zhì)粒增大一倍，轉化效率下降一個(gè)數量級。
2. 轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少最終用于涂板的菌量，本公司生產(chǎn)的EHA105(pSoup)化學(xué)轉化感受態(tài)細胞具有四環(huán)素抗性，但在轉入目標質(zhì)粒涂板篩選陽(yáng)性克隆時(shí)，只需加入目標質(zhì)?？剐缘目股?，不加四環(huán)素。
3. 平板上陽(yáng)性克隆密度過(guò)大時(shí)，由于營(yíng)養不足，陽(yáng)性克隆生長(cháng)變慢，菌落變小，為了獲得大的菌落，應減少質(zhì)粒用量。
4. 利福平濃度不應高于25 μg/ml，過(guò)高的利福平濃度不利于農桿菌生長(cháng)，會(huì )降低其生長(cháng)速度和轉化效率。
5. 培養基中加入利福平的目的是防止雜菌生長(cháng)、篩選農桿菌；根據所用菌株抗性加入鏈霉素或慶大霉素可防止Ti質(zhì)粒丟失，但鏈霉素不利于農桿菌的轉基因操作，培養農桿菌時(shí)不考慮鏈霉素或慶大霉素，Ti質(zhì)粒丟失的概率極低 (可以忽略)。