GV3101(pSoup-P19) Elec：                                         50μl/支
pGs2（control vector，10ng/μl )                                     10μl
保存條件(保質(zhì)期)：                                          -80℃（12個(gè)月） 

基因型
C58 (rif^R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) ( gent^R) Nopaline(pSoup-p19-tet^R)
產(chǎn)品說(shuō)明
P19蛋白來(lái)源于番茄叢矮病毒，可抑制宿主對外源基因的RNA沉默效應，提高異源基因轉錄本的穩定性，進(jìn)而促進(jìn)異源蛋白的表達，廣泛應用于轉基因植物及煙草葉片，擬南芥葉片，番茄葉片或原生質(zhì)體的瞬時(shí)表達系統中。GV3101菌株為C58型背景，核基因中含有篩選標簽——利福平抗性基因rif，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無(wú)自身轉運功能的胭脂堿型Ti質(zhì)粒pMP90 (pTiC58DT-DNA)，此質(zhì)粒含有vir基因 (vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA)質(zhì)粒自身的T-DNA轉移功能被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移)。pMP90 (pTiC58DT-DNA)型Ti 質(zhì)粒含有篩選標簽：gent，賦予GV3101菌株慶大霉素抗性；在GV3101菌株中轉入help質(zhì)粒：pSoup-p19即為GV3101(pSoup-p19)菌株，可幫助pGreen，62SK，pGs2等質(zhì)粒在農桿菌中復制，同時(shí)賦予該菌株四環(huán)素（tet）抗性。適用于擬南芥、煙草、玉米、土豆等植物的轉基因操作。本公司的GV3101 (pSoup-p19)電轉感受態(tài)特別適用于大質(zhì)粒的轉化：經(jīng)pGs2(卡那霉素抗性)質(zhì)粒檢測轉化效率>10⁵ cfu/ μg DNA；經(jīng)pGs2-ZH(卡那霉素抗性)質(zhì)粒(size:40 kb)檢測轉化效率可達5×10³ cfu/μg DNA。
 
操作方法
1. 0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘，待其瀝干水分，正置5分鐘，使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5 cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5分鐘充分降溫。
2. 取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)插入冰中5分鐘，待其融化，加入1-5 μg質(zhì)粒DNA（質(zhì)粒體積不大于6ul，最好用試劑盒抽提，雙蒸水溶解），用手撥打管底混勻，立即插入冰中，用200 μl槍頭將感受態(tài)-質(zhì)?；旌衔锟焖僖频诫姄舯?，蓋上杯蓋，空管保留待用。
3. 啟動(dòng)電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數為Biorad 推薦，使用者也可按所用電轉儀推薦的protocol操作），將電擊杯快速放入電轉槽中，電擊完成快速插入冰中，加入700 μl無(wú)抗生素的LB并轉移到感受態(tài)空管中，28℃振蕩培養2~3小時(shí)。
4. 6000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊涂布于含相應抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培養箱培養2-3天

（當平板只含有50 μg/ml kan 時(shí)，28℃培養48 h即可；平板中同時(shí)加入50 μg/ml kan，20 μg/ml rif 時(shí)，需28℃培養60 h；如果使用的平板含有50 μg/ml rif 則需要28℃培養72-90 h）。